对一个克隆的DNA片段作物理图谱分析，需要用（)。A．核酸外切酶B．限制性内切酶 C DNA连接酶C．脱氧核

特定大小的片段。各种各样的DNA聚合酶也是克隆所必需的，包括将RNA转录出单链DNA的______。DNA______用于连接限制性片段。克隆也需要来源于微生物的DNA序列，包括用来运载被______克隆载体。质粒载体来源于天然细菌质粒，通常携带有______抗性基因。其他载体来源于噬菌体，如λ噬菌体，它们经过修饰后可以运输外源DNA。要想克隆一个感兴趣的真核生物的基因就必须先制作一个能与该基因杂交的______。人们已经发展了很多有效而精细的技术来分析克隆的DNA。例如，极微量的DNA片段可以通过______得到扩增。在感兴趣基因的启动子上连接，如______或______之类的______基因能够定量检测基因的活性。

就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必须包括三个部分：______、______、______。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子质量。

A.在合适的位置具有至少一个多克隆位点，供外源DNA插入以形成重组体分子

B.克隆载体能携带外源DNA片段进入受体细胞，或停留在细胞质中能自我复制，或整合到染色体DNA上随染色体DNA的复制一起被复制

C.克隆载体必须具有用于选择克隆子的标记基因

D.克隆载体必须是安全的，不应含有对受体细胞有害的基因，并且不会任意转入受体细胞以外的其他生物细胞，尤其是人的细胞

质粒pHUBI DNA是双链环状，长5.7kb(5.7×10³个碱基对)。这个质粒带有某基因，它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点：EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性；在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形，在圆周上以5.7kb总长标出刻度。

表16-2-11
酶混合物	片段长度(kb)
EcoRI EcoRI，BamHI EcoRI，HpaI EcoRI，SalI EcoRI，BglII EcoRI，PstI PstI，BglII BglII，HpaI	5.7 0.4，5.3 0.5，5.2 0.7，5.0 1.1，4.6 2.4，3.3 1.3，4.4 0.6，5.1

早的转录反应之一。在小鼠细胞中，c-fos的转录水平在5min内显著增加，在10～15min时达最大值之后突然下降。为了研究人类c-fos基因的瞬时诱导的机制，可以克隆一个DNA片段，它含有全长的转录单元，这个转录单元起始于转录起始点上游-750bp处，终止于+1.5kb的poly(A)加入位点(图13-3-60(1)A)。当把这个克隆转至小鼠细胞中时(我们可以较为容易区分克隆与内源性c-fos基因的mRNA)，一天后加入血清(富含生长因子)刺激细胞生长。你发现同样的瞬时诱导(图13-3-60(2)A)。尽管与小鼠基因相比，时间上有略微的延长。

通过分析一个类似增强子元件(SRE血清反应元件)的一系列缺失突变体，发现在转录起始点上游的300核苷酸序列对于在加入血清后增强转录是必需的。通过建立包含有人β-球蛋白部分基因(它编码一个极为稳定的mRNA)的各种杂交基因来研究c-fos mRNA的稳定性。球蛋白基因的结构和两种杂交基因如图13-3-60(1)B、C、D所示。在低血清浓度下，当杂交基因转染鼠细胞时，24小时后它才对血清作出反应(图13-3-60(2)B、C所示)。

A.基因是DNA具有遗传效应的片段

B.一个DNA分子有一个基因

C.染色体由DNA和蛋白质组成

D.细胞中DNA大多在染色体上

A.110个

B.220个

C.330个

D.440个

A.磷酸二酯键只能由DNA聚合酶催化形成

B.限制性核酸内切酶将一个DNA分子片段切成两个片段需消耗两个水分子

C.RNA聚合酶的结合位点为起始密码子

D.用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞获得原生质体,便于植物杂交育种

A.基因工程可以克服物种间的生殖隔离，定向改造生物的遗传性状

B.限制酶可特异性地识别6个、5个、4个核苷酸组成的序列

C.载体上有一个或多个限制酶的切割位点，供外源DNA片段插入

D.常用天然质粒作载体，质粒上的标记基因便于重组DNA分子的筛选

A.PCR技术需在生物体外进行

B.从理论上推测一个DNA经三轮复制后产物中同时含有两种引物的DNA片段有6个

C.PCR技术扩增时必须有解旋酶才能解开双链DNA

D.PCR技术的原理是DNA双链复制